Isolamento mitocondriale: una tecnica per isolare i mitocondri da un campione di tessuto di cancro ovarico umano

I

mitocondri, gli organelli citoplasmatici noti come centrali elettriche della cellula, subiscono drastici cambiamenti strutturali e funzionali durante la progressione del cancro.

Per isolare i mitocondri, prendi il tessuto canceroso pulito in un piatto di vetro e tritalo in piccoli pezzi. Trasferire i pezzi in una provetta contenente un tampone di isolamento mitocondriale. Omogeneizzare il campione per distruggere le cellule e rilasciare il loro contenuto, compresi gli organelli.

Centrifugare il composto a bassa velocità. Questo pellettizza i componenti più densi come nuclei, detriti di tessuto e qualsiasi cellula intatta, lasciando componenti meno densi come mitocondri, microsomi, perossisomi e lisosomi nel surnatante. Raccogliere il surnatante e centrifugare ad alta velocità. I microsomi, essendo relativamente più leggeri, rimangono nel surnatante, mentre la frazione grezza contenente mitocondri pellettizza sul fondo.

Rimuovere il surnatante e risospendere il pellet in un mezzo di gradiente di densità adeguato. Impostare un gradiente di densità discontinuo stratificando la frazione mitocondriale grezza all'interno di diversi mezzi di densità, disponendoli in ordine decrescente d