Sistema di coltura prossimale: una tecnica di coltura in vitro per studiare la segnalazione paracrina tra le cellule

Nella segnalazione paracrina, le cellule producono e secernono molecole di segnalazione che inducono risposte nelle cellule vicine. Per imitare la segnalazione paracrina, iniziare preparando sospensioni unicellulari di cellule tumorali ovariche e cellule mesoteliali nel loro terreno appropriato.

Quindi, prendi un inserto membranoso poroso invertito in una piastra di coltura sterile. Pipet la sospensione di cellule tumorali sulla superficie inferiore della membrana dell'inserto per formare una cupola liquida. Incubare per consentire alle cellule di stabilirsi e attaccarsi alla membrana.

Capovolgere l'inserto per drenare il supporto. Trasferire l'inserto in una piastra di coltura fresca contenente terreni di coltura per nutrire le cellule tumorali aderenti alla superficie inferiore della membrana. Ora, aggiungere la sospensione di cellule mesoteliali nel pozzetto dell'inserto. Incubare per consentire alle cellule di aderire al lato opposto della membrana, negando qualsiasi contatto diretto tra i due tipi di cellule.

Durante la coltura, entrambi i tipi di cellule secernono fattori di segnalazione. Queste molecole si diffondono attraverso la membrana porosa verso le cellule vicine. Si