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0 visualizzazioni • 3:20 min. • April 30th, 2023
La cavità peritoneale è lo spazio tra la parete addominale e il rivestimento degli organi interni. Per l'iniezione intraperitoneale, iniziare trattenendo un topo vivo per la regione del collo in modo tale che la testa del topo si inclini verso il basso con l'addome ventrale esposto.
Trattenere il topo ne limita il movimento e sposta gli organi addominali verso il diaframma, prevenendo danni accidentali agli organi durante l'inserimento dell'ago.
Adiacente alla linea mediana che attraversa l'addome del topo, nel quadrante in basso a destra, individuare un punto per l'inserimento dell'ago. Questo sito previene il rischio di perforare il cieco.
Quindi, prendi una siringa contenente una sospensione unicellulare di cellule tumorali ovariche. Inserire l'ago nel punto prescelto a una profondità di circa mezzo centimetro per penetrare solo nella parete addominale esterna. Infine, iniettare lentamente la sospensione delle cellule tumorali. Ciò garantisce un'efficiente distribuzione delle cellule all'interno della cavità peritoneale.
Rimetti il topo nella sua gabbia e monitoralo per la crescita del tumore. I tessuti all'interno della cavità peritoneale possono rilasciare specifiche molecole chemiotattiche che attraggono le cellule tumorali portando alla loro migrazione e colonizzazione, contribuendo infine allo sviluppo del tumore.
Caricare 500 microlitri della sospensione unicellulare marcata in modo fluorescente nella siringa. Quindi, inserire la siringa in un ago sterile con tappo da 25 gauge per ridurre il taglio cellulare prima dell'iniezione. Trattenendo il mouse con l'altra mano, raccogli il mouse per la collottola e tieni la coda usando il palmo e l'indice. Quindi, fissa la zampa posteriore sinistra tra l'anulare e il mignolo. Per evitare di traumatizzare gli organi addominali, trattenere bene il topo in modo che non possa muoversi durante l'iniezione.
Immagina una linea che attraversa l'addome e individua un punto sul lato destro dell'animale e vicino alla linea mediana. Il punto di ingresso è craniale e leggermente mediale dell'ultimo capezzolo. Prepararsi a inserire l'ago sul lato destro del topo per evitare il cieco e ridurre il rischio di perforare l'intestino. Inserire l'ago nella regione laterale inferiore dell'addome del topo a una profondità di circa 0,5 centimetri. Tirare indietro lo stantuffo per verificare che l'ago non sia penetrato in un vaso sanguigno o in altri organi peritoneali.
Se non viene aspirato alcun fluido, iniettare il campione utilizzando una pressione lenta e costante. Quindi, estrai l'ago e rimetti il topo nella sua gabbia. Non richiudere la siringa prima di averla smaltita nel contenitore per oggetti taglienti.