Modellazione della colonizzazione cellulare del cancro ovarico dell'omento: un metodo ex vivo per stabilire la colonizzazione della macchia lattiginosa di cellule di cancro ovarico marcate in fluorescenza in espianti di omento murino

L'omento, un tessuto ricco di adiposi all'interno della cavità peritoneale, è costituito da depositi di grasso che forniscono un microambiente adatto alle cellule tumorali metastatiche per colonizzare e formare tumori secondari. Per studiare questa colonizzazione ex vivo, iniziare posizionando un inserto di coltura cellulare membranosa permeabile all'interno di una piastra di coltura.

Applicare un adesivo tissutale sulla regione interna della membrana dell'inserto. Posizionare un espiantante omentale di topo sull'adesivo per immobilizzare il tessuto. Semina delicatamente una sospensione di cellule tumorali ovariche marcate in modo fluorescente sopra l'omento.

Quindi, riempire i lati del pozzetto con un terreno adatto per integrare la crescita cellulare e incubare per il tempo desiderato. Il tessuto omentale contiene strutture specializzate chiamate macchie lattiginose, che sono gruppi di cellule immunitarie impacchettate attorno a reti di vasi sanguigni. Queste cellule immunitarie secernono alcuni fattori chimici che attirano le cellule tumorali e ne promuovono l'impianto. Le cellule tumorali colonizzate proliferano, simulando condizioni metastatiche.

Infine, scartare i supporti esauriti. Osservare la coltura utilizzando un microscopio a fluorescenza per valutare le colonie di cellule tumorali fluorescenti all'interno del tessuto omentale.

Coltivare e preparare cellule marcate in fluorescenza e risospendere a una concentrazione di 2 milioni di cellule per millilitro. Applicare circa 6 microlitri di adesivo per tessuti sulla membrana dell'inserto di coltura e lasciarlo asciugare all'aria. Quindi, lavare la membrana due volte con acqua sterile per rimuovere l'adesivo in eccesso prima di asciugare le membrane all'aria sotto una cappa laminare.

Asportare con cura l'omenta e fissarlo alla membrana rivestita di adesivo utilizzando una pinza sterile. Dopo aver lasciato aderire il tessuto alla membrana per un minuto, aggiungere 500 microlitri di sospensione cellulare sopra ogni omento in ogni inserto di coltura.

Quindi, riempire l'area intorno alla camera del pozzetto con 2,5 millilitri di terreno DME/F-12. Incubare l'omenta con sospensione cellulare per sei ore a 37 gradi Celsius in un ambiente con il 5% di CO2. Togliete accuratamente e lavate l'omenta con circa 10 millilitri di PBS. Infine, visualizzare i focolai di cellule tumorali fluorescenti utilizzando un sistema di imaging fluorescente appropriato.