Saggio di clearance mesoteliale: una tecnica in vitro per quantificare la capacità di invasione degli sferoidi del cancro ovarico nei monostrati di cellule mesoteliali

Durante le metastasi del cancro ovarico, le cellule maligne si staccano dal sito del tumore primario e iniziano a circolare all'interno della cavità peritoneale. Queste cellule possono quindi formare grappoli o sferoidi che aderiscono al monostrato di cellule mesoteliali che riveste la cavità peritoneale. Man mano che il tumore cresce, elimina le cellule mesoteliali sottostanti per facilitare l'invasione.

Per modellare la clearance mesoteliale, iniziare seminando cellule mesoteliali che esprimono la proteina fluorescente verde o GFP in un piatto di coltura con fondo di vetro rivestito di fibronectina. Il rivestimento di fibronectina fornisce una matrice che favorisce l'adesione cellulare. Incubare la capsula per consentire alle cellule mesoteliali di diffondersi e formare un monostrato.

Successivamente, trasferire una sospensione di sferoidi di cellule tumorali ovariche che esprimono la proteina fluorescente rossa sul monostrato mesoteliale. Visualizzare la coltura per una durata prolungata utilizzando la microscopia a fluorescenza time-lapse. Gli sferoidi rosso-fluorescenti si depositeranno e si attaccheranno al monostrato mesoteliale verde-fluorescente.

Le cellule tumorali eserci