Finestra dell'uovo: un metodo per aprire il guscio dell'uovo di gallina fecondato per esporre la vascolarizzazione della membrana corioallantoica

In un uovo di gallina fecondato, la membrana corioallantoidea o CAM è uno strato altamente vascolarizzato situato sotto la membrana interna del guscio d'uovo. Funziona per sostenere lo sviluppo embrionale.

Per esporre una CAM completamente sviluppata, inizia posizionando un candelabro per uova - una fonte di luce intensa - contro il guscio dell'uovo per visualizzare l'interno dell'uovo. Individua la cella d'aria tra le membrane esterna e interna del guscio d'uovo e una vascolarizzazione ramificata prominente all'interno dell'uovo. Segna le loro posizioni esternamente.

In questi punti, fai dei piccoli fori circolari nel guscio d'uovo per esporre la membrana del guscio bianco sottostante. Forare delicatamente la membrana esposta in entrambe le posizioni senza interrompere la CAM o causare perdite di albumina o sangue.

Mantenendo l'uovo longitudinalmente, applicare l'aspirazione sopra l'apertura naturale della cella d'aria per aspirare l'aria dall'interno. La pressione negativa risultante abbassa la CAM al di sotto della seconda apertura, generando una cella d'aria artificiale sulla rete vascolare.

Delinea la cella d'aria riposizionata. Tagliare il guscio d'uovo, qualche centimetro all'interno del contorno, senza interrompere il confine cella d'aria-CAM. Rimuovere il guscio inciso per creare una grande finestra, esponendo la CAM e la vascolarizzazione sottostanti. Usa una pellicola trasparente per sigillare la finestra sulle uova vitali.

Il giorno 7 o 8 dello sviluppo, quando la CAM si è completamente sviluppata, spegnere il rotatore di uova e posizionare circa 1-3 uova nel rack per uova nella camera di biosicurezza. Con le luci spente, posiziona un candelabro contro il guscio dell'uovo per identificare e segnare la posizione della cella d'aria di un uovo. Quindi, sposta il candelabro sull'involucro per trovare una grande rete di vasi sanguigni, ruotando l'uovo secondo necessità.

Una vascolarizzazione ideale si ramifica vicino al centro dell'uovo. Utilizzare un pennarello per tracciare la vascolarizzazione da utilizzare per l'impianto. Dopo aver riacceso la luce nel cofano, utilizzare un utensile rotante a batteria dotato di una mola abrasiva in carburo di silicio per praticare un piccolo foro nel guscio direttamente sopra il centro della cella d'aria. Quando la maggior parte del guscio è stata rimossa, ma con la membrana interna bianca intatta, praticare un altro piccolo foro dove verrà aperta la finestra vascolare come appena dimostrato. Quando il secondo foro è pronto, utilizzare un ago calibro 18 per perforare delicatamente la membrana interna bianca sopra la cella d'aria e il sistema vascolare, facendo attenzione che la membrana interna bianca, ma non la CAM, venga interrotta in tutta l'area perforata.

Con la luce del cofano di nuovo spenta, utilizzare il candelabro per uova per verificare che la cella d'aria sia stata trasferita dall'estremità dell'uovo all'area sopra il sistema vascolare. Se necessario, posizionare il tubo del vuoto inserito in un controller per pipette attorno al foro sopra la cella d'aria originale e applicare delicatamente l'aspirazione a brevi raffiche per spostare la cella d'aria. Segna il contorno della nuova posizione della cella d'aria, a circa 0,5 centimetri all'interno del confine air-CAM, e fissa un pezzo di nastro da imballaggio abbastanza grande da coprire il foro sopra la nuova cella d'aria.

Dopo aver preparato le altre due uova come appena dimostrato, rimetti le uova nell'incubatrice e apri eventuali uova aggiuntive per l'esperimento in gruppi da 1 a 3 come dimostrato. Quando tutte le uova sono state aperte, trasferire da 1 a 3 uova con celle d'aria riposizionate nella rastrelliera per uova nella camera di biosicurezza e utilizzare un utensile rotante a batteria dotato di una rotella di taglio circolare per tagliare una piccola linea oltre il bordo della cella d'aria completamente attraverso la cella senza interrompere la CAM o il sistema vascolare. Usando le forbici curve, taglia intorno alla cella d'aria rimanente per creare una finestra nel guscio e verificare la vitalità dell'embrione.

Gli embrioni vitali mostreranno una vascolarizzazione estesa, albume chiaro, movimento embrionale e/o un battito cardiaco visibile. Negli embrioni non vitali, la CAM può apparire opaca con pochi, se non nessuno, vasi presenti e gli embrioni possono essere piccoli o assenti senza movimento o battito cardiaco. Usando la pinza Semken, estrarre piccoli pezzi di cotone da un batuffolo di cotone sterile e tamponare delicatamente la superficie CAM degli embrioni vitali per rimuovere la polvere e i detriti del guscio. Quindi, coprire l'apertura del guscio con un quarto di pellicola trasparente di 6 x 7 centimetri senza toccare la CAM e rimettere le uova nell'incubatrice con la finestra aperta rivolta verso l'alto. Usa un pezzo di griglia per uova, il bordo del rotatore di uova o un altro oggetto adatto per sostenere le uova che continuano a rotolare.