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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 3:26 min. • April 30th, 2023
La membrana corioallantoidea del pollo, o CAM, è una membrana altamente vascolarizzata che si trova nelle uova di alcuni vertebrati come i polli. Questa membrana extra-embrionale riveste una membrana a guscio non vascolare e funge da sito di scambio di ossigeno gassoso e anidride carbonica tra l'embrione e l'ambiente.
Per generare un modello di cancro CAM, iniziare con un uovo di gallina fecondato e vitale che porta una CAM completamente sviluppata con un guscio parzialmente aperto che espone la sua vascolarizzazione ramificata. Verificare che il CAM sia staccato dalla membrana del guscio.
Posiziona un anello antiaderente sterile su un punto di diramazione dei vasi sanguigni. Usando una bacchetta di vetro, strofinare delicatamente la membrana all'interno dell'anello per raschiare il suo strato epiteliale esterno ed esporre lo strato mesodermico sottostante che trasporta il sistema vascolare. Pipetta: una sospensione raffreddata di cellule tumorali mescolate con una matrice extracellulare adatta nell'anello. L'anello limita la dispersione cellulare.
Lascia che la matrice si solidifichi per fissare le cellule all'interno. Sigillare l'apertura del guscio d'uovo e incubare l'uovo in condizioni adeguate. La densa vascolarizzazione all'interno dello strato mesodermico fornisce ossigeno e nutrienti essenziali alle cellule tumorali, fornendo così un microambiente adatto per la loro crescita ed espansione.
Per preparare una sospensione di cellule tumorali per il trapianto, raccogliere le cellule dalla coltura cellulare tumorale di interesse e sedimentare le cellule mediante centrifugazione. Aspirare il surnatante e risospendere meccanicamente le cellule nel mezzo residuo. Posizionare la sospensione cellulare sul ghiaccio e utilizzare una pipetta per misurare il volume delle cellule nel terreno. Quindi, risospendere le cellule a una concentrazione da 1 a 2 milioni di cellule in 20-100 microlitri di terreno, integrato con matrice extracellulare da 2,7 a 4 milligrammi per millilitro e qualsiasi fattore di crescita o altro additivo di interesse.
Per l'impianto di cellule tumorali, utilizzando un anello antiaderente, posizionare fino a 6 uova da impiantare sulla rastrelliera e arrotolare i bordi della medicazione in pellicola trasparente verso la finestra aperta per rimuovere la pellicola dai gusci. Controlla se le uova sono vitali e sane. Le uova ideali avranno un vaso grande con vasi ramificati più piccoli al centro dell'area aperta.
Utilizzando una pinza a iride curva, posizionare un anello antiaderente sterile sulla camma sopra il vaso, idealmente su un punto di diramazione. Utilizzare un'asta di agitazione in vetro sterile per abradere delicatamente la CAM e pipettare la sospensione di cellule tumorali al centro dell'anello. Quando tutte le cellule sono state consegnate, sigillare l'apertura con un quarto di pellicola trasparente di 6 x 7 centimetri ed etichettare l'ovulo con una designazione di impianto appropriata. Quindi, posiziona l'uovo in modo sicuro nell'incubatrice, con l'apertura del guscio rivolta verso l'alto.