Saggio di spin down dell'agarosio: una tecnica per incorporare organoidi per l'analisi istologica

Le colture 3D di organoidi di cellule tumorali ricapitolano molte caratteristiche fisiopatologiche dei tumori umani. Pertanto, queste colture in vitro costituiscono un modello eccellente per la ricerca sul cancro.

Per la lavorazione di questi organoidi, iniziare con una coltura di organoidi 3D preformati cresciuti in un'adeguata matrice di membrana basale. Aggiungere il terreno di recupero cellulare desiderato e incubare. Il mezzo facilita la depolimerizzazione del gel della matrice, rilasciando gli organoidi 3D nella soluzione.

Centrifugare questa miscela per pellettizzare gli organoidi. Il terreno di recupero contenente i componenti della matrice rimane nel surnatante. Scartare il surnatante. Quindi, aggiungere la soluzione di paraformaldeide al pellet dell'organoide. La sostanza chimica entra nelle cellule organoidi e si lega agli amminoacidi, causando la reticolazione delle proteine e la fissazione del campione. Questo passaggio è fondamentale per qualsiasi applicazione istologica a valle.

Pellettizzare gli organoidi per separare e rimuovere il surnatante contenente paraformaldeide. Aggiungere l'agarosio fuso caldo agli organoidi. Utilizzare un ago per staccare e disperdere gli