Induzione dell'autofagia basata su ADI nelle cellule di cancro alla prostata: una tecnica basata su enzimi per misurare la risposta autofagica nelle cellule

L'autofagia è un processo intracellulare che facilita la degradazione di componenti citoplasmatici e organelli indesiderati all'interno di compartimenti digestivi specializzati chiamati lisosomi. Per valutare l'autofagia, iniziare con una coltura aderente di cellule tumorali della prostata che esprimono proteine marcatrici autofagiche chiamate LC3 accoppiate a proteine fluorescenti verdi.

Intrinsecamente, le cellule tumorali della prostata mancano dell'enzima argininosuccinato sintasi necessario per la sintesi degli aminoacidi arginina. Queste cellule sono, quindi, dipendenti dall'integrazione esterna di arginina attraverso i terreni per la sopravvivenza e la proliferazione.

Successivamente, trattare le cellule con arginina deiminasi o ADI. L'ADI idrolizza l'arginina libera nel terreno, portando alla deplezione dell'arginina. Di conseguenza, le cellule subiscono uno stress metabolico, avviando internamente una risposta autofagica. Contemporaneamente, trattare le cellule con un colorante fluorescente rosso che etichetta i lisosomi all'interno delle cellule.

Durante l'autofagia, strutture membranose a forma di coppa chiamate fagofori si assemblano attorno ai componenti citoplasmatici