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0 visualizzazioni • 2:43 min. • April 30th, 2023
La tecnica di inclusione in paraffina fissata in formalina o FFPE consente la conservazione di campioni di tessuto fissati, disidratati e chiariti all'interno di blocchi di paraffina per la conservazione a lungo termine. La FFPE preserva le proteine e altri componenti intracellulari vitali senza compromettere la morfologia dei tessuti.
La deparaffinazione, o la rimozione della cera di paraffina che circonda il tessuto incorporato, è una fase fondamentale prima di elaborare qualsiasi campione di tessuto FFPE per l'analisi a valle. Per iniziare la deparaffinazione, iniziare con un vetrino che trasporta una sezione di tessuto FFPE non colorato di interesse con uno spessore appropriato.
Immergere la sezione di tessuto in un bagno di xilene e incubare per la durata desiderata. Lo xilene, un solvente organico, dissolve la cera di paraffina che si è incorporata e penetrata nel tessuto. La rimozione completa della cera di paraffina espone il campione di tessuto trasparente fissato e disidratato.
Dopo la deparaffinazione, trattare il campione con etanolo assoluto. L'etanolo sposta e rimuove qualsiasi traccia di xilene dalla sezione del tessuto. Successivamente, immergere il tessuto in concentrazioni decrescenti di etanolo. Il processo reidrata il tessuto per l'analisi istologica a valle.
Infine, lasciare lo scivolo indisturbato per la durata desiderata. Questa fase consente all'etanolo e all'acqua di evaporare e ottenere una sezione di tessuto reidratato a secco.
Per iniziare, preparare 10 micrometri di sezioni non colorate fissate in formalina e incluse in paraffina. Posizionare i vetrini in un supporto per vetrini di vetro e riempirlo di xilene, assicurandosi che tutto il tessuto sul vetrino sia sommerso. Lasciare i vetrini nello xilene per 15 minuti. Quindi, versare lo xilene tenendo i vetrini con la punta di una pipetta in modo che non cadano. Versare altro xilene allo stesso livello di prima e ripetere l'incubazione.
Versare lo xilene e riempire il supporto del vetrino con etanolo al 100%, assicurandosi che tutto il tessuto sul vetrino sia completamente sommerso. Lasciare i vetrini nell'etanolo per 3 minuti. Quindi, sostituisci l'etanolo con etanolo fresco e lasciali incubare per altri due minuti. Versare l'etanolo e rimuovere i vetrini. Posizionali con cura a faccia in su su un tovagliolo di carta pulito e lasciali asciugare per 10 minuti.