Conversione del bisolfito del DNA genomico: un metodo per studiare la metilazione del DNA in campioni di DNA genomico da tessuto tumorale gastrointestinale
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0 visualizzazioni • 4:36 min. • April 30th, 2023
La metilazione del DNA comporta l'aggiunta di gruppi metilici ai residui di citosina del DNA per formare metil-citosina, causando l'alterazione del DNA e la regolazione dell'espressione genica.
Per studiare la metilazione del DNA, inizia prelevando un estratto di DNA grezzo da cellule cancerose. Aggiungere un tampone di diluizione e incubare a temperatura ambiente. Il tampone diluisce la miscela e denatura il DNA a doppio filamento in DNA a singolo filamento, favorendo l'accessibilità delle basi per le reazioni successive.
Aggiungere un reagente di conversione e incubare al buio. Il bisolfito di sodio nel reagente innesca la solfonazione e la successiva deaminazione dei residui di citosina non metilati, con conseguente formazione di uracil-solfonato. Tuttavia, i residui di citosina metilata rimangono invariati.
Successivamente, integrare il DNA con un tampone legante e trasferirlo in una colonna filtrante di spin preassemblata. Il tampone aiuta il DNA a legarsi al filtro.
Centrifuga per rimuovere la miscela di tampone e reagente bisolfito dal DNA intrappolato nella colonna. Scartare il flusso. Aggiungere un tampone di desolfonazione alcalina al DNA. Il tampone aiuta nella rimozione
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