Isolamento peritoneale dei neutrofili a bassa densità: una tecnica per ottenere neutrofili a bassa densità dal liquido di lavaggio peritoneale utilizzando la selezione cellulare attivata magneticamente

I neutrofili a bassa densità, o LDN, sono una sottopopolazione distinta di neutrofili che si trova in numero elevato durante condizioni patologiche come il cancro gastrointestinale. Gli LDN possono essere isolati dai lavaggi della cavità peritoneale o dal liquido di lavaggio dei pazienti.

Innanzitutto, filtrare il liquido di lavaggio per rimuovere i detriti di tessuto. Centrifugare il filtrato per ottenere un pellet contenente cellule del sangue, comprese le LDN. Risospenderlo in un tampone adatto. Sovrapporre questa sospensione su un mezzo di gradiente di densità adatto e ottimale per l'isolamento LDN.

Centrifuga per separare i diversi componenti del sangue in base alla loro densità relativa. I globuli rossi più densi formano lo strato inferiore, mentre la frazione plasmatica meno densa forma lo strato più alto. Le LDN meno dense occupano lo strato intermedio insieme ad altre celle mononucleate.

Trasferire lo strato intermedio in una provetta nuova contenente un reagente bloccante. I componenti del reagente bloccano i siti di legame non specifici su tutte le superfici delle cellule non bersaglio e aumentano la specificità per LDN durante la successiva marcatura.

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