Microscopia a fluorescenza time-lapse di trappole extracellulari neutrofile o NET: una tecnica per analizzare l'interazione post-adesione tra cellule tumorali e NET

Durante condizioni patologiche come il cancro, i neutrofili attivati rilasciano trappole extracellulari per neutrofili o NET, una rete di fibre di DNA extracellulari associate a istoni ed enzimi proteolitici. Queste strutture intrappolano le cellule tumorali e svolgono un ruolo chiave nelle metastasi del cancro.

Studiare il comportamento post-adesione delle cellule tumorali intrappolate nei NET in vitro, in primo luogo, coltivare neutrofili a bassa densità - una sottopopolazione di neutrofili - in un piatto di coltura rivestito di polimero che facilita l'adesione cellulare. Incubare per attivare i neutrofili per rilasciare NET simili a mesh.

Successivamente, aggiungi un colorante nucleare fluorescente verde impermeabile alla membrana per colorare le fibre di DNA nei NET in modo specifico. Rimuovere il mezzo esaurito. Aggiungere una sospensione di cellule tumorali alla coltura di neutrofili.

Incubare la coltura per un breve periodo per facilitare l'interazione cellula tumorale-NET. La componente DNA dei NET funziona come un fattore chemiotattico che stimola la migrazione delle cellule tumorali e ne favorisce l'adesione ai NET.

Rimuovere il mezzo esaurito. Sciacquare delicatamente la