Colorazione negativa di esosomi purificati: una procedura per visualizzare la morfologia degli esosomi utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione

Per eseguire la colorazione negativa degli esosomi - vescicole sferiche nanometriche - iniziare prendendo una griglia di microscopia elettronica adatta. Prepara la griglia usando uno scaricatore di incandescenza. Questo processo rende la superficie della griglia idrofila per una migliore adesione dei campioni.

Contemporaneamente, assumere una sospensione di esosomi purificati in una provetta. Integrare la provetta con paraformaldeide, un fissativo per campioni, e incubare. La paraformaldeide penetra negli esosomi e lega le proteine e gli acidi nucleici. Questo passaggio è fondamentale per preservare la morfologia degli esosomi.

A questo punto, caricare la sospensione dell'esosoma sulla griglia pre-preparata e incubare per consentire l'adsorbimento. Quindi, aggiungi alcune gocce di acetato di uranile, una macchia di metallo pesante, sulla griglia. Gli ioni uranile si legano alle proteine e ai lipidi della membrana, formando un deposito attorno al confine dell'esosoma.

Infine, lavare la griglia in acqua per rimuovere la macchia in eccesso. Lasciare asciugare la griglia e creare immagini utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione o TEM.

Quando un fascio di elettroni colpisc