Isolamento di colonie di cellule tumorali metastatiche da CAM di pollo: una procedura per isolare le cellule tumorali da colture di uova senza guscio
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0 visualizzazioni • 3:40 min. • April 30th, 2023
La membrana corioallantoidea di pollo o CAM è una membrana a tre strati situata appena sotto il guscio dell'uovo. È costituito da un ectoderma esterno, un mesoderma altamente vascolare e l'endoderma più interno.
Il mesoderma CAM comprende vasi sanguigni, fibroblasti e componenti stromali e fornisce quindi un ambiente favorevole per la colonizzazione delle cellule tumorali.
Per isolare le cellule tumorali colonizzate dalla CAM, iniziare prendendo una coltura di ovuli senza guscio pre-iniettata con cellule tumorali marcate in fluorescenza in un piatto. Visualizza la coltura degli ovuli con un microscopio a fluorescenza. Localizzare le colonie di cancro metastatico fluorescenti e compatte.
Asportare delicatamente il tessuto CAM contenente le colonie metastatiche di interesse. Trasferire il tessuto CAM asportato in una provetta da microcentrifuga. Tritare il tessuto in piccoli pezzi per rendere la CAM accessibile al trattamento enzimatico nelle fasi successive.
Integrare la provetta con l'enzima collagenasi e incubare. La collagenasi degrada la proteina del collagene nel mesoderma CAM e avvia la dissociazione delle colonie tumorali. Centrifugare la sospensione per pellettizzare le cell
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