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0 visualizzazioni • 3:24 min. • April 30th, 2023
La lingua costituisce un epitelio squamoso stratificato e uno strato sottostante di tessuto connettivo denso chiamato lamina propria. L'epitelio è costituito da cellule epiteliali squamose multistrato che forniscono protezione contro lo stress meccanico.
Per isolare le cellule epiteliali, iniziare con una lingua di topo appena raccolta. Tritare la lingua per ottenere frammenti di tessuto più piccoli. Successivamente, trattare i frammenti con un cocktail di digestione personalizzato contenente collagenasi, ialuronidasi ed enzimi desossiribonucleasi.
La collagenasi e gli enzimi ialuronidasi digeriscono la matrice extracellulare che tiene insieme il tessuto, favorendo il rilascio delle singole cellule nella sospensione. La desossiribonucleasi degrada il DNA libero rilasciato dalle cellule lisate.
Aggiungere un tampone contenente siero al campione digerito per inattivare gli enzimi che idrolizzano le proteine. A questo punto, filtrare il campione attraverso filtri cellulari per rimuovere eventuali frammenti di tessuto e detriti non digeriti e ottenere una sospensione unicellulare di cellule epiteliali.
Centrifugare per separare le celle. Eliminare il surnatante contenente la miscela di
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