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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 2:36 min • April 30th, 2023
Durante l'inoculazione intramucosa ortotopica, le cellule tumorali che corrispondono all'istotipo del tessuto mucoso vengono consegnate nel tessuto mucoso di un animale ricevente.
Per iniziare, trattieni un topo anestetizzato per il collo su una piattaforma chirurgica per un più facile accesso alla bocca.
Preparare una sospensione di cellule tumorali altamente metastatizzanti in una matrice di membrana basale raffreddata in una siringa. La bassa temperatura impedisce alla sospensione di solidificarsi.
Iniettare con cautela questa sospensione nella guancia interna o nella regione vestibolare del topo. La regione buccale è rivestita dalla mucosa buccale, che è circondata da una rete di vasi sanguigni e linfatici.
Garantire l'erogazione completa della sospensione di cellule tumorali e ritrarre delicatamente l'ago. Lascia che la matrice si solidifichi e incastri le cellule all'interno.
Consenti al mouse di riprendersi. Entro pochi giorni dall'iniezione, un tumore primario si sviluppa nel sito di iniezione. Alla fine, le cellule di questo tumore con un alto potenziale metastatico possono viaggiare attraverso il sistema linfatico e stravasare nei linfonodi.
Queste cellule tumorali si adattano al loro nuovo microambiente e proliferano e stabiliscono colonie metastatiche nei linfonodi.
Immediatamente prima dell'iniezione, mescolare le cellule con un rapporto di sospensione di cellule tumorali 1 a 1 rispetto alla matrice della membrana basale su ghiaccio. Caricare una siringa da 0,5 millilitri dotata di un ago da 23G con 100 microlitri di cellule per animale ricevente. Posizionare le siringhe sul ghiaccio e confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi in un topo anestetizzato.
Quindi, inserire l'ago nella regione buccale destra o sinistra attraverso lo spazio aperto disponibile su entrambi i lati della bocca, mantenendo la siringa parallela alla regione vestibolare mentre si trova all'interno della cavità orale, per facilitare l'iniezione dell'intero volume di 100 microlitri della sospensione della matrice della membrana basale cellulare per un periodo di 5 secondi. Tenere la siringa in posizione per altri 5 secondi per assicurarsi che tutto il materiale sia stato iniettato prima di estrarre delicatamente la siringa. I tumori diventeranno grossolanamente visibili in circa una settimana.