Ibridazione con sonda e amplificazione del segnale nell'ibridazione in situ dell'RNA: una tecnica per rilevare specifiche sequenze di RNA in sezioni di tessuto

Per rilevare una specifica sequenza di RNA in una cellula, inizia prendendo una sezione di tessuto su un vetrino. Sovrapporre la sezione di tessuto con un tampone di ibridazione adatto contenente le sonde di RNA bersaglio.

Queste sonde sono molecole di RNA a forma di Z con una porzione di riconoscimento del bersaglio a un'estremità e una sequenza di coda all'altra estremità. Un braccio distanziatore collega queste due estremità.

Ora, incubare il vetrino in un forno di ibridazione a una temperatura ottimale. Le sonde di RNA a forma di Z entrano nella cellula e si ibridano con la corrispondente sequenza di mRNA bersaglio a coppie.

Togliere la diapositiva dal forno. Immergere il vetrino in una soluzione di lavaggio per rimuovere eventuali sonde non legate e il tampone di ibridazione in eccesso.

Successivamente, aggiungere una soluzione di preamplificatore e incubare. La molecola del preamplificatore si attacca alla sequenza di coda di due sonde Z adiacenti. Questa molecola non si lega a una singola sonda Z, garantendo la specificità.

Quindi, aggiungere la miscela di reagenti dell'amplificatore e incubare. Più molecole di amplificatore si ibridano nella singola sequenza di preamplifica