Rilevamento del segnale RNA CISH: una tecnica per rilevare i segnali cromogenici durante l'ibridazione in situ dell'RNA in campioni di tessuto intatto

Per rilevare i segnali cromogenici durante l'ibridazione dell'RNA, iniziare prendendo una sezione di tessuto su un vetrino. Questa sezione contiene l'RNA bersaglio, pre-ibridato con sonda RNA marcata con perossidasi di rafano.

Erogare alcune gocce di diaminobenzidina o DAB, un substrato di rilevazione, sulla sezione di tessuto e incubare.

Il DAB entra nella cellula e l'enzima perossidasi di rafano lo ossida per formare un precipitato marrone. Questa reazione conferisce un colore marrone a specifiche sequenze di RNA nella cellula. Le cellule che non contengono RNA bersaglio non avranno attività perossidasica e rimarranno non colorate.

Quindi, controcolorare la sezione di tessuto con ematossilina. L'ematossilina si lega al DNA e conferisce una macchia viola alla sezione del tessuto.

Trattare la sezione di tessuto con acqua ammoniacale, una soluzione azzurrante. Riduce l'intensità della colorazione viola, facendo apparire le cellule blu. Questo passaggio è essenziale per una chiara visualizzazione delle macchie marroni all'interno delle cellule.

Ora, immergere la sezione di tessuto in concentrazioni crescenti di etanolo e successivamente trattarla con xilene, un solvente organico. Que