Raccolta di DRG dalla colonna vertebrale del ratto: una procedura per estrarre il ganglio della radice dorsale dalla colonna vertebrale di un modello di ratto

I gangli della radice dorsale o DRG sono gruppi di corpi cellulari di neuroni sensoriali alloggiati all'interno delle vertebre su entrambi i lati del midollo spinale. La loro funzione principale è quella di trasmettere segnali neuronali sensoriali dal sistema nervoso periferico al sistema nervoso centrale.

Per isolare i gangli della radice dorsale, inizia prendendo una spina dorsale di ratto appena raccolta. Sezionare la colonna vertebrale per separare le regioni cervicale, toracica e lombare. Conservare le sezioni della colonna vertebrale in un tampone adatto per garantire l'idratazione dei tessuti.

Ora, posiziona la sezione toracica con il lato dorsale rivolto verso l'alto. Dividi la sezione in due metà laterali. Quindi, fissare la metà sezionata del segmento della colonna vertebrale, con il lato mediale rivolto verso l'alto. Staccare delicatamente il midollo spinale diviso in due - una lunga struttura tubolare - dalle ossa vertebrali segmentate della sezione per rivelare il DRG sottostante.

I DRG appaiono come masse bianche distinte con radici dorsali e ventrali incorporate all'interno del canale spinale. Con una pinza fine, estrarre con cautela il DRG per rimuoverlo dal canale spinale. Infine, trasferire il DRG raccolto in un mezzo adatto per ulteriori applicazioni a valle.

Pulisci la pelle dorsale di un ratto soppresso con etanolo al 70% e usa le forbici per rimuovere la colonna vertebrale. Separare le regioni cervicale, toracica e lombare e posizionare le sezioni della colonna vertebrale in un piatto di coltura di 10 centimetri con PBS per mantenere idratati i campioni di tessuto.

Usando delicate forbici ossee, apri le ossa vertebrali toraciche e cervicali negli aspetti dorsale e ventrale per separare la colonna vertebrale in due metà laterali e posiziona le sezioni di tessuto in un piatto pulito di 10 centimetri con PBS fresco. Usando una pinza, staccare delicatamente il midollo spinale dalle ossa vertebrali per visualizzare i gangli della radice dorsale.

Posizionando le punte di un paio di pinze sottili tenute sotto ciascun ganglio, afferrare il tessuto ed estrarlo dalla cavità ossea in cui è alloggiato. Immediatamente dopo la raccolta, immergere ogni ganglio in un terreno di coltura DMEM integrato con il 2% di penicillina e streptomicina o penna/streptococco e il 10% di siero fetale bovino o FBS per aiutare a prevenire la contaminazione batterica dei tessuti nervosi.