Raccolta della membrana corioallantoica di pulcino: un metodo per isolare la membrana corioallantoidea portatrice di innesto tumorale dall'uovo di gallina

La membrana corioallantoidea o CAM è una membrana extraembrionale, che aderisce strettamente alla membrana interna del guscio di un ovulo intatto. La CAM è un sistema ideale per l'impianto e la modellazione di tumori perché è una membrana naturalmente immunodeficiente e altamente vascolarizzata.

Per raccogliere un CAM portatore di tumore, in primo luogo, prendi un uovo di gallina fecondato vitale con un CAM completamente sviluppato precedentemente trapiantato con un tumore. Aggiungere paraformaldeide al CAM. La paraformaldeide lega le proteine della membrana, rendendo la membrana più rigida per facilitarne la raccolta.

Quindi, taglia intorno all'uovo per separare la parte superiore del guscio dall'altro dell'uovo, con la CAM portatrice del tumore ancora attaccata al guscio rimosso. Tenere e sollevare la camma da un bordo per staccarla dolcemente dal guscio dell'uovo.

Successivamente, posizionare il CAM prelevato in paraformaldeide con l'innesto tumorale rivolto verso l'alto. La paraformaldeide preserva la morfologia della CAM e dell'innesto tumorale, preparando così la membrana prelevata per varie analisi a valle.

Al termine dell'incubazione, posizionare le uova sul banco di lavoro del laboratorio. Utilizzare una siringa per perforare la pellicola di medicazione di ciascun uovo e applicare circa 300 microlitri di paraformaldeide al 4% su ciascuna membrana corioallantoica per irrigidire leggermente il tessuto e facilitare il processo di raccolta.

Usando le forbici, rimuovere la metà superiore del guscio d'uovo con la membrana corioallantoidea attaccata. Ridurre le dimensioni del guscio a circa 3 centimetri di diametro, mantenendo la porzione della membrana corioallantoidea in cui sono stati innestati il ganglio della radice dorsale e le cellule tumorali all'interno del centro del frammento di guscio. Quindi, afferrare la membrana corioallantoidea con una pinza fine e staccare il tessuto dal guscio dell'uovo per il trasferimento in un pozzetto di una piastra a 6 pozzetti contenente 2 millilitri di paraformaldeide al 4% per pozzetto.