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0 visualizzazioni • 3:02 min • April 30th, 2023
L'inoculazione ortotopica facilita la consegna di cellule tumorali a un animale ricevente in un organo o sito che corrisponde all'istotipo tissutale. Per iniziare, prepara un topo nudo immunocompromesso anestetizzato in posizione supina.
Successivamente, praticare un'incisione chirurgica nella regione del collo per rivelare le ghiandole salivari. Spostare le ghiandole salivari e sezionare i muscoli della cinghia per esporre la trachea sottostante e la ghiandola tiroidea.
La ghiandola tiroidea, una ghiandola endocrina, è costituita da due lobi che si trovano su entrambi i lati della trachea e circondano la cartilagine cricoidea. Questi due lobi sono collegati da una sottile striscia di tessuto tiroideo chiamata istmo.
Ora, preparare una sospensione di cellule tumorali della tiroide con un tampone adatto in una siringa. Iniettare con cautela la sospensione cellulare nel lobo tiroideo del topo.
Successivamente, riposizionare le ghiandole salivari e suturare l'incisione. Consenti al mouse di riprendersi. Monitorare il topo settimanalmente per osservare la crescita di tumori ortotopici all'interno del lobo tiroideo.
Per l'inoculazione ortotopica di cellule tumorali tiroidee, sospendere un'aliquota di cellule Cal62 in 5 microlitri di PBS e iniettare per via sottocutanea 100 microlitri di analgesico e 100 microlitri di antibiotico in un topo nudo BALB/c di 7 settimane. Dopo aver confermato la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, posizionare l'animale sotto un microscopio da dissezione e disinfettare il collo dell'animale con iodopovidone.
Successivamente, praticare un'incisione di circa 2 centimetri nella pelle e spostare le ghiandole salivari per esporre il collo. Usa una pinza da dissezione e/o forbici per sezionare i muscoli della cinghia per esporre la trachea e la ghiandola tiroidea e usa una siringa da 10 microlitri per iniettare il volume di 5 microlitri di cellule tumorali nel lobulo tiroideo destro, situato a lato della cartilagine cricoidea.
Quando tutte le cellule sono state consegnate, riposizionare le ghiandole salivari e utilizzare suture intrecciate di seta, rivestite e non assorbibili per chiudere l'incisione. Quindi, applicare iodopovidone sull'area della ferita e posizionare il topo su una coperta termica con monitoraggio fino al completo recupero.