Incorporamento di sferoidi 3D in gocce di gel di agarosio: una tecnica per conservare gli sferoidi per l'analisi a valle

Gli sferoidi sono aggregati cellulari sferici tridimensionali in vitro che imitano il microambiente tumorale in vivo e aiutano a studiare la progressione del tumore. Per preservare questi sferoidi mediante incorporazione, iniziare prendendo una provetta sterile contenente sferoidi in un tampone desiderato.

Trattare gli sferoidi con paraformaldeide. La paraformaldeide lega le proteine cellulari, con conseguente stabilizzazione e conservazione della struttura cellulare. Centrifugare gli sferoidi e rimuovere il surnatante contenente paraformaldeide. Risospendere il pellet di sferoide nel tampone.

Quindi, preparare la concentrazione desiderata di soluzione di gel di agarosio fuso. Fare una goccia di gel di agarosio su un vetrino da microscopio. Mantenere il vetrino su un blocco riscaldante per evitare la solidificazione dell'agarosio.

Utilizzando una micropipetta con una punta a orifizio largo, raccogliere gli sferoidi dal tubo. Pipettare con cura gli sferoidi al centro della goccia di gel di agarosio senza toccare il vetrino del microscopio. Successivamente, incubare il vetrino a una temperatura adeguata per consentire alla MEC di solidificarsi e intrappolare gli sferoidi all'interno.