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0 visualizzazioni • 2:22 min. • April 30th, 2023
La macinazione criogenica o criofresatura è una tecnica che consente di raffreddare campioni di tessuto decellularizzati a temperature estremamente basse e di macinarli in una polvere fine mantenendo la loro composizione biochimica.
Per iniziare, ottenere una matrice extracellulare decellularizzata derivata da un tessuto liofilizzato o ECM di interesse. Tritarlo per ottenere piccoli frammenti.
Quindi, trasferisci i frammenti ECM tritati in un barattolo di macinazione. Introdurre le sfere di macinazione nella giara di macinazione. Immergere la giara di macinazione carica in azoto liquido per congelare il campione a -196 °C.
Caricare il barattolo raffreddato in un sistema di criomacinazione. Sottoporre il campione congelato alla criomacinazione a una frequenza appropriata per la durata desiderata.
Durante la criomacinazione, la giara di macinazione oscilla radialmente in posizione orizzontale. Di conseguenza, l'inerzia delle sfere di macinazione facilita l'impatto con il campione congelato con elevata energia alle estremità arrotondate del barattolo e la sua polverizzazione.
Inoltre, il movimento della giara di macinazione accoppiato al movimento delle sfere di macinazione favorisce un'intensa miscelazione del campione per ottenere una polvere fine con distribuzione granulometrica uniforme.
Ora, trasferisci la polvere ECM criomacinata in una fiala di vetro. Sigillare bene la fiala per evitare l'esposizione all'umidità. Essiccare il campione fino a nuovo utilizzo.
Usa forbici chirurgiche affilate per tritare finemente il tessuto decellularizzato. Per criomacinare il tessuto lavorato, riempire una camera di macinazione in acciaio inossidabile da 25 millilitri per un sistema di macinazione a sfere da laboratorio con ECM liofilizzato tritato e aggiungere due sfere di macinazione in acciaio inossidabile da 10 millimetri.
Chiudere e immergere completamente la camera di macinazione carica in azoto liquido per 3 minuti. Quindi, macinare il campione congelato a 30 hertz per 3 minuti. Ripetere l'immersione in azoto liquido e la macinazione fino a quando l'ECM non viene macinato in una polvere fine.