Preparazione della sospensione ECM: una tecnica per ottenere una sospensione omogenea da una matrice extracellulare derivata dal tessuto
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0 visualizzazioni • 4:16 min. • April 30th, 2023
La matrice extracellulare o ECM, una complessa rete di supporto nei tessuti, è costituita da proteoglicani e proteine.
Per ottenere una ECM omogeneizzata, iniziare prelevando una quantità misurata di polvere ECM decellularizzata in una provetta. A questo punto, aggiungere un tampone acidificato al tubo per formare una sospensione ECM.
Contemporaneamente, in un'altra provetta, sciogliere l'alfa-amilasi - un enzima glicolitico - nello stesso tampone acidificato. Il pH acido di questo tampone facilita l'attività ottimale dell'enzima alfa-amilasi.
Quindi, integrare il tubo contenente la sospensione ECM con una soluzione enzimatica alfa-amilasi. Incubare la provetta agitando costantemente. L'alfa-amilasi idrolizza i glicani - le frazioni di carboidrati - presenti nei proteoglicani.
Centrifugare per pellettare la frazione ECM ricca di proteine, lasciando i glicani digeriti e gli enzimi esausti nel surnatante. Scartare il surnatante.
Risospendere il pellet in una soluzione di cloruro di sodio. Gli ioni cloruro estraggono le proteine dal pellet ECM nella sospensione. Centrifugare ed eliminare il surnatante contenente cloruro di sodio.
Quindi, aggiungi l'acido acetico al pellet ECM contenen
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