Preparazione dell'impalcatura esofagea suina decellularizzata: una tecnica per generare un'impalcatura acellulare da un esofago di maiale

Gli scaffold decellularizzati derivati dalla matrice extracellulare di un tessuto specifico imitano il loro microambiente extracellulare nativo. Questi scaffold mantengono la loro integrità strutturale e composizione biochimica e fungono da piattaforme promettenti per l'ingegneria tissutale.

Per preparare un'impalcatura esofagea suina decellularizzata, iniziare con un esofago suino appena asportato. Dividere in due l'esofago longitudinalmente e sciacquarlo con un tampone adatto per rimuovere eventuali detriti. Quindi, fissare l'esofago con la sua superficie mucosa, lo strato più interno, rivolto verso l'alto.

Separare la mucosa dalla sottomucosa sottostante a un'estremità dell'esofago. Sezionare l'esofago longitudinalmente lungo il tessuto connettivo lasso della mucosa chiamato lamina propria per separare completamente la superficie della mucosa dalla sottomucosa sottostante.

Inoltre, asportare le regioni prossimale e distale della mucosa, che contengono una maggiore densità di ghiandole sottomucose e uno strato di lamina propria più spesso. Tagliare il tessuto mucoso in pezzi di dimensioni uniformi.

Trattare il tessuto con una soluzione salina ipertonica integrata con antibiotici. Gli antibiotici aiutano a prevenire la crescita batterica. Ad alta concentrazione di soluto, l'acqua si sposta fuori dalle cellule e ne provoca il restringimento. Questo passaggio aiuta ulteriormente la morte cellulare e il distacco dalla matrice extracellulare.

Ora, stacca delicatamente l'epitelio allentato dal tessuto sottostante. Sciacquare il fazzoletto con un tampone per rimuovere i detriti cellulari. Infine, incubare il tessuto nel glicerolo, che facilita ulteriormente la decellularizzazione dei tessuti disidratando e lisando le cellule preservando l'integrità della membrana basale.

Per preparare gli scaffold esofagei di maiale decellularizzati, iniziare utilizzando le forbici e un paio di pinzette per aprire longitudinalmente un esofago di maiale. Successivamente, lavare l'esofago in un vaso sterile da 180 millilitri contenente 100 millilitri di PBS sterile per 10 minuti agitando delicatamente per rimuovere eventuali detriti.

Durante il risciacquo del fazzoletto, spruzzare una tavola di dissezione in sughero con etanolo al 70%. Quando il tappo è asciutto, appuntare l'esofago sulla tavola con la mucosa rivolta verso l'alto. Ora, usa una pinzetta sterile per afferrare la superficie della mucosa a un'estremità dell'esofago e tirare via il tessuto dalla tavola per separare la mucosa dalla sottomucosa sottostante.

Quindi, utilizzando una lama di bisturi sterile, sezionare l'esofago longitudinalmente lungo la lamina propria, rimuovendo i perni man mano che la dissezione progredisce per consentire il sollevamento della mucosa. Scartare la sottomucosa sottostante e utilizzare un bisturi per tagliare la mucosa rimanente in pezzi quadrati di 5 centimetri. Lavare i pezzi in 150 millilitri di PBS sterile con una leggera agitazione come appena dimostrato.

Dopo cinque minuti, trasferire il tessuto in un vaso da 180 millilitri contenente 150 millilitri di soluzione di cloruro di sodio da 1 molare integrata con antibiotici a 37 gradi Celsius. Dopo 72 ore, trasferire il tessuto in 150 millilitri di PBS sterile, a quel punto l'epitelio avrà iniziato a separarsi visibilmente dal tessuto sottostante.

Utilizzare una pinza sterile e una lama di bisturi per rimuovere l'epitelio che si stacca e posizionare il tessuto rimanente in una pentola fresca da 150 millilitri di PBS sterile con tre lavaggi di cinque minuti con una leggera agitazione. Il tessuto deve ora essere conservato in glicerolo per un minimo di quattro mesi per sterilizzare completamente l'impalcatura.