JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 3:32 min. • April 30th, 2023
Per un carcinoma a cellule uroteliali derivato da un paziente o per la generazione di modelli murini UCC, un topo immunocompromesso viene inoculato con cellule UCC umane per studiare la progressione e le metastasi del cancro.
Per iniziare lo xenotrapianto, prendere un topo femmina anestetizzato immunocompromesso. Radere la parte bassa della schiena del topo per esporre la sua regione pelvica. Ora, posiziona il mouse in posizione supina con la pelle esposta a contatto con un cuscinetto dispersivo che funge da elettrodo di messa a terra per completare il circuito durante la stimolazione elettrica.
Quindi, prendi un anagiocatete, un sottile tubo cavo, attaccato a un filo guida. Lubrificare la superficie del catetere e inserirlo nell'uretra del topo per accedere alla sua vescica. Posizionare un elettrodo attivo sul filo guida per stimolare la parete della vescica. Questa procedura aiuta a rompere lo strato mucopolisaccaridico, una barriera protettiva della mucosa della vescica, e aiuta nel successivo attecchimento delle cellule tumorali.
Ora, rimuovere delicatamente il gruppo angiocatete-filo guida dall'uretra. Prendi un secondo angiolettico collegato a una siringa contenente la sospensione cellulare UCC e inseriscilo nell'uretra del topo. Iniettare le cellule UCC nella vescica del topo. Le cellule tumorali interagiscono con la mucosa della vescica per formare un tumore che può eventualmente diffondersi ad altri tessuti e organi.
Per preparare l'animale all'iniezione di cellule UCC, utilizzare una crema depilatoria per radere la parte bassa della schiena di una femmina di topo NOD/SCID di 6-8 settimane. Per somministrare le cellule UCC nella vescica, in primo luogo, impostare una macchina per elettrocauterizzazione monopolare a una potenza di 4 watt. Dopo aver anestetizzato il topo, posizionarlo in posizione supina con il muso in un cono nasale di isoflurano e la schiena nuda saldamente radicata su un elettrodo dispersivo.
Lubrificare un atleta calibro 24 con gelatina lubrificante e quindi inserire l'atleta delicatamente ma saldamente attraverso l'uretra del topo. Se il catetere si piega all'ingresso, inserire il filo guida a metà nel catetere per garantire stabilità. Quindi, inserire completamente il filo guida diritto con nucleo fisso da 0,64 millimetri 1 millimetro oltre l'estremità dell'angiocatetere.
Tenere il perno monopolare sul filo guida per 1 secondo, consentendo l'irritazione elettrica della mucosa vescicale. Collegare un nuovo angiocatetere sterile a una siringa Luer-Lok da 1 millilitro e aspirare fino a 200 microlitri di cellule UCC. Rimuovere il filo guida e l'antacatetere dall'uretra, quindi inserire l'antacatetere con una siringa di cellule attaccata ad esso.
Iniettare 50 microlitri di cellule nella vescica del topo e, per consentire alle cellule di aderire alla parete della vescica, attendere qualche secondo prima di rimuovere l'angiocatete. Infine, rimuovere il mouse dal cono dell'isoflurano e dal cuscinetto di messa a terra e osservarlo per 1 ora dopo la procedura per segni di sofferenza.