Colorazione del DNA extracellulare: un metodo per identificare il DNA extracellulare nelle sezioni di tessuto FFPE

Una cellula morente rilascia una frazione di DNA all'esterno della cellula chiamata DNA extracellulare. Per colorare il DNA extracellulare, iniziare prendendo una sezione di tessuto inclusa in paraffina fissata in formalina, o FFPE, su un vetrino. Riscaldare il vetrino per la durata desiderata. Ciò facilita l'adesione del tessuto sulla superficie del vetrino e ammorbidisce la paraffina circostante.

Immergere il vetrino nel liquido di deparaffinazione per sciogliere completamente lo strato di paraffina attorno al tessuto. Quindi, immergere il vetrino in concentrazioni decrescenti di etanolo per reidratare il tessuto deparaffinizzato. Dopo la reidratazione, immergere il vetrino in una soluzione bollente per il recupero dell'antigene. Questo trattamento smaschera gli epitopi che sono stati alterati durante il processo di fissazione.

Sovrapporre il vetrino con anticorpi primari e lasciarli legare a specifici epitopi non mascherati presenti sulla cellula. Quindi, aggiungere gli anticorpi secondari marcati in fluorescenza, che si legano agli anticorpi primari. Immergere il vetrino nella soluzione Sudan Black per ridurre l'autofluorescenza di fondo.

Infine, posizionare una goccia di terre