Analisi del patch-clamp perforato mediato da amfotericina-B: una tecnica elettrofisiologica per studiare le correnti ioniche nelle cellule della vescica urinaria
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0 visualizzazioni • 4:20 min. • April 30th, 2023
La tecnica del patch-clamp perforato consente di misurare in tempo reale le correnti ioniche associate all'attività dei canali ionici su cellule come il muscolo liscio detrusore, o DSM, cellule della vescica urinaria.
Per iniziare, caricare la sospensione cellulare DSM su una camera di vetro e incubare per consentire l'adesione cellulare. Successivamente, aggiungere una soluzione extracellulare contenente tetraetilammonio e ioni cesio alle cellule aderenti. Questi cationi bloccano i canali del potassio sulla membrana cellulare e inibiscono le correnti di potassio interferenti.
Successivamente, prendere una pipetta patch-clamp lucidata, un sottile tubo di vetro cavo contenente un elettrodo di registrazione collegato a un amplificatore. Riempire la pipetta con una soluzione intracellulare e riempirla con la stessa soluzione ma contenente amfotericina-B, un antibiotico perforante la membrana.
A questo punto, immergere il puntale della pipetta nella soluzione extracellulare contenente le cellule DSM. Dopo aver impostato il potenziale e la corrente a livelli appropriati, far avanzare la punta della pipetta verso la membrana cellulare e contemporaneamente monitorare la resistenza dell'el
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