Colorazione periodica di Schiff acido o PAS: un metodo per valutare le deformità strutturali del glomerulo

Il glomerulo è una complessa rete di capillari all'interno del rene che filtra i rifiuti e rimuove il liquido in eccesso dal sangue. La velocità di filtrazione renale dipende da questa struttura specializzata, che può essere esaminata utilizzando la colorazione Periodic Acid Schiff o PAS.

Per iniziare, prendi una sezione di corteccia renale paraffinizzata su un vetrino. Trattare il vetrino con xilene. Le molecole di xilene dissolvono la cera di paraffina dalla sezione del tessuto. Quindi, esporre il campione a concentrazioni decrescenti di alcol. L'alcol rimuove le tracce di xilene mentre reidrata la sezione di tessuto per il successivo legame della macchia.

Ora, aggiungere acido periodico al campione. L'acido periodico converte i dioli presenti nei polisaccaridi tissutali, come il glicogeno o la mucina, in aldeidi. Queste aldeidi reagiscono con il reagente di Schiff, una combinazione di acido fucsina solforoso, formando un colorante color magenta che colora la sezione del tessuto. Sciacquare il vetrino per rimuovere la macchia in eccesso.

Dopo il risciacquo, aggiungere ferro-ematossilina, un colorante antivibrante nucleare che si lega al DNA e lo colora di viola. Lavare per rimuovere la macchia in eccesso. Infine, disidratare il campione con gradazioni crescenti di alcol seguito da xilene, che funge da agente di pulizia. Questo passaggio aiuta a migliorare il contrasto della sezione di tessuto per l'esame microscopico.

La malattia glomerulare può essere visualizzata come ispessimento della membrana basale, capillari alterati e cellule anormali correlate a una funzionalità renale compromessa.

Per una visualizzazione dettagliata delle cellule glomerulari e della matrice mesangiale, essiccare i campioni di corteccia renale fissati inclusi in paraffina a 37 gradi Celsius per 1 ora, seguiti da deparaffinazione con xilene consecutivo e immersioni discendenti di etanolo. Reidratare i campioni in acqua distillata per 5 minuti e incubare i vetrini in una soluzione di acido periodico in una cappa aspirante.

Dopo 5 minuti, sciacquare i vetrini con tre lavaggi di 5 minuti in 100 millilitri di acqua distillata, seguiti da un'incubazione di 15 minuti nel reagente di Schiff. Al termine dell'incubazione, lavare i vetrini in acqua corrente del rubinetto per 5 minuti e controcolorare con ematossilina per 3 secondi prima di risciacquare accuratamente in acqua corrente del rubinetto per altri 15 minuti.

Quindi, disidratare i vetrini con immersioni ascendenti di etanolo e due immersioni consecutive di xilene di 3 minuti. Dopo l'essiccazione all'aria, i vetrini possono essere montati con un mezzo di montaggio a base di xilene per la valutazione della loro struttura glomerulare su un microscopio ottico con un ingrandimento di 400X.

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