Iniezione chirurgica di Cisterna Magna: un metodo per la somministrazione di cellule tumorali direttamente nel sistema nervoso centrale del modello murino

Il cervello murino è rivestito da tre strati meningei: la membrana durale più esterna, la membrana aracnoidea media e la membrana pia più interna.

Nella regione posteriore del cervello, l'aracnoide e la membrana della pia sono interrotte da uno spazio subaracnoideo cerebrospinale o riempito di liquido cerebrospinale, chiamato cisterna magna.

Per eseguire l'iniezione intracisternale delle cellule tumorali, iniziare prendendo un modello murino anestetizzato. Prepara il mouse rimuovendo i peli dalla superficie ventrale della testa.

Ora, posiziona il mouse in posizione prona e attacca la sua testa a una cornice stereotassica. Posiziona il naso del topo, puntandolo leggermente verso il basso per livellare la colonna vertebrale con la cisterna magna.

Usando le forbici, fai una piccola incisione sulla linea mediana sull'estremità posteriore del cervello, all'altezza delle orecchie.

Tirare da parte con cautela lo strato muscolare superficiale. La cisterna magna può essere visualizzata come un triangolo rovesciato coperto dalla membrana durale trasparente.

Quindi, prendi una siringa contenente una sospensione di cellule tumorali circolanti.

Mantenendo la muscolatura circostante retratta, inserire la siringa sotto la membrana della dura dura, perforando la membrana aracnoidea. Questo passaggio consente l'iniezione di cellule tumorali direttamente nel liquido cerebrospinale presente nella cisterna magna.

Infine, chiudere il sito dell'incisione applicando le clip della ferita e consentire al topo di riprendersi.

Iniziare iniettando nel topo per via sottocutanea 1 milligrammo per chilogrammo di buprenorfina a rilascio prolungato. Dopo aver anestetizzato il topo, prepararlo per l'intervento chirurgico. Agganciare il sito chirurgico con un'area di bordo sufficiente per evitare che la pelliccia contamini il sito di incisione.

Radere il pelo di tutta la superficie della testa e preparare la pelle con tecnica sterile. Quindi, saturare il sito con un antisettico germicida per la pelle, lavorando dal centro del sito alla periferia, e lasciarlo asciugare.

Posizionare il corpo in modo che la colonna vertebrale sia mantenuta a livello della cisterna magna. Mentre applichi una leggera trazione alla coda, posiziona del nastro adesivo alla base della coda per fissarla.

Applicare un telo sterile o un telo in plastica sterile con retro adesivo per proteggere il sito chirurgico dalla contaminazione. Con il collo in piena estensione, fai scorrere le punte delle forbici chirurgiche verso il basso con una leggera pressione sull'osso occipitale iniziando appena tra i padiglioni auricolari.

Praticare una piccola incisione della linea mediana da 3 a 5 millimetri leggermente sopra la concavità palpata. Aspirare 5 microlitri di sospensione cellulare in una siringa Hamilton da 30 G. Usa una pinza a punta smussata con una punta da 1 a 2 millimetri per premere delicatamente sulla cisterna magna.

Introdurre le punte in posizione chiusa e aprirle esercitando una pressione verso il basso sulla dura. Ripetere la dissezione smussata fino a quando la membrana durale non è facilmente identificabile e i vasi sanguigni associati sono visibili nell'area esposta.

Tenendo la pinza, aprirla per ritrarre la muscolatura circostante. Introdurre un ago non carotante da 30 G sotto la dura madre per visualizzare lo smusso, assicurandosi che l'ago venga introdotto solo appena oltre lo smusso stesso.

Aprire lentamente uno stantuffo della siringa ed erogare le cellule appena sotto la dura. Se si notano perdite nel sito di iniezione, applicare una leggera pressione con un applicatore con punta di cotone. Chiudere la pelle applicando una clip per ferite o una microgoccia di adesivo cutaneo.

Monitorare i topi ogni giorno dopo l'intervento chirurgico per la prima settimana. Se un topo sembra provare dolore o angoscia, trattarlo con un'iniezione sottocutanea di 10 milligrammi per chilogrammo di carprofene, una volta ogni 12-24 ore per un massimo di 5 giorni in base alla consultazione veterinaria e alla direttiva.