JoVE Encyclopedia of Experiments
Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 3:24 min • April 30th, 2023
Nella malattia leptomeningea, le cellule tumorali di altri organi del corpo metastatizzano nel liquido cerebrospinale o CSF contenuto all'interno delle leptomeningi, sottili strati di tessuto che circondano il cervello.
L'iniezione intracerebroventricolare facilita la somministrazione diretta del farmaco nel liquido cerebrospinale, eludendo la barriera emato-encefalica.
Per iniziare, prepara un topo anestetizzato in posizione prona.
Incidi la testa per rivelare il teschio. Localizzare la bregma, il punto di giunzione delle suture coronali e sagittali.
Usando un microtrapano, praticare un foro nel cranio a una distanza appropriata dal bregma per accedere allo strato meningeo più esterno di tessuto connettivo denso: la dura madre.
Quindi, inserire delicatamente l'ommaya, una piccola porta di iniezione, nel foro.
Una volta fatto, sutura la pelle circostante e lascia che l'ommaya si attacchi per una durata ottimale.
Quindi, collegare la siringa riempita con la sospensione di farmaco desiderata all'ommaya.
Dopo aver impostato una portata adeguata, iniettare la sospensione del farmaco nella dura madre.
L'ommaya fornisce un percorso sterile per la somministrazione diretta del farmaco nel liquido cerebrospinale nei ventricoli cerebrali del cervello.
Ora, staccare la siringa e lasciare intatta l'ommaya nel cranio per il dosaggio successivo.
Consenti al mouse di riprendersi.
Nel tempo, le molecole del farmaco migrano verso il sito del cancro e impediscono la crescita e la proliferazione delle cellule tumorali.
Assemblare il dispositivo di iniezione Murine Ommaya utilizzando una porta di iniezione miniaturizzata da 25G e un disco distanziatore da 1 millimetro.
Utilizzare un adesivo sterile cianoacrilato per garantire la penetrazione di circa 2,5 millimetri della cannula metallica nell'emisfero cerebrale destro e preparare la pelle secondo la tecnica sterile.
Praticare una piccola incisione cutanea, seguita da una dissezione smussata dei tessuti sottocutanei sottostanti per esporre il cranio. Asciugare il cranio utilizzando bastoncini applicatori imbevuti di perossido di idrogeno con punta di cotone.
Praticare un foro di 0,9 millimetri nel cranio, 0,5 millimetri posteriormente e 1,1 millimetri lateralmente del bregma, per esporre la dura madre.
Sposta il microtrapano da parte e incidi delicatamente l'osso che circonda immediatamente il foro della bava. Fissare una porta di iniezione al cranio utilizzando un adesivo sterile cianoacrilato e inserirlo a una profondità di circa 2,5 millimetri.
Sutura l'incisione utilizzando suture di nylon 4-0 non assorbibili in uno schema di punto interrotto o sutura a corda di borsa. Ospita i topi post-chirurgici in gabbie individuali per il recupero.
Per dosare il mouse, accedere all'Ommaya murino utilizzando un adattatore per iniezione e una siringa di Hamilton. Usando una pinza, afferrare la parte superiore della porta di iniezione in miniatura e inserire delicatamente l'adattatore dell'iniettore della porta completamente nel setto della porta.
Una volta effettuata l'iniezione, staccare l'Ommaya Murino dall'adattatore di iniezione della porta con una pinza.