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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 6:23 min. • April 30th, 2023
Le microglia sono macrofagi cerebrali che aiutano a rimuovere agenti patogeni, detriti cellulari e cellule nervose cancerose o neuroblastoma mediante un processo chiamato fagocitosi.
Per imitare la fagocitosi in vitro, iniziare con una coltura di cellule di neuroblastoma fissate in paraformaldeide.
La paraformaldeide, un fissativo chimico, provoca la distribuzione casuale di fosfolipidi di membrana come la fosfatidilserina, con conseguente traslocazione sulla superficie esterna della membrana cellulare e contemporaneamente stabilizzando la struttura cellulare.
Ora, aggiungi un colorante fluorescente reattivo all'ammina sensibile al pH alla coltura cellulare di neuroblastoma e incuba.
Le molecole del colorante si legano ai gruppi amminici della fosfatidilserina sulla superficie cellulare del neuroblastoma.
Centrifugare la provetta e rimuovere il surnatante contenente molecole di colorante non legate. Sciacquare il pellet della cella con un tampone adatto e centrifugare.
Rimuovere il surnatante e risospendere il pellet nel terreno di coltura.
Successivamente, seminare i macrofagi precolorati in una piastra di coltura. I macrofagi colorati appariranno rossi con un nucleo blu.
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