Purificazione dei nuclei basata sulla centrifugazione in gradiente: una tecnica per ottenere una frazione ultrapura di nuclei intatti utilizzando la centrifugazione in gradiente di densità

Per isolare e purificare i nuclei intatti, iniziare prendendo una frazione di nuclei grezzi in una provetta. La frazione contiene nuclei intatti, insieme a nuclei rotti, frammenti e detriti.

Miscelare questa frazione con un mezzo a gradiente di densità adatto in modo da formare una sospensione della concentrazione più bassa.

Ora, le soluzioni di stratificazione di densità crescenti dello stesso mezzo di gradiente sotto la frazione di nuclei grezzi pre-preparata per generare un gradiente di densità discontinuo a più stadi. Questo passaggio consente alla frazione di nuclei grezzi di formare una banda nella parte superiore del gradiente.

Quindi, centrifugare la provetta a bassa velocità.

Sulla base delle differenze di forma e massa, i nuclei intatti migrano in modo diverso rispetto ai detriti e ai frammenti nucleari. Ciò si traduce in nuclei intatti che formano una banda separata.

Dopo la centrifugazione, individuare la banda distinta costituita da nuclei intatti all'interfaccia delle soluzioni a gradiente di densità.

Utilizzando una pipetta, aspirare gli strati superiori del gradiente per facilitare l'accesso alla banda dei nuclei puri. Raccogliere la banda contenente i nuclei in una