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0 visualizzazioni • 2:41 min. • April 30th, 2023
Per differenziare specifiche popolazioni cellulari in un tessuto tumorale cerebrale eterogeneo di topo per il loro successivo isolamento, iniziare prendendo un vetrino che trasporta la sezione di tessuto tumorale cerebrale crioconservata di interesse.
Incubare in sequenza il tessuto in concentrazioni decrescenti di etanolo. L'etanolo dissolve il mezzo di inclusione che è penetrato nel tessuto e lo fissa mantenendo l'integrità dell'acido nucleico.
Inoltre, l'etanolo reidrata il tessuto, consentendo una colorazione uniforme durante le fasi successive.
Ora, tratta il tessuto con Cresyl violet. Il cresil violetto - un colorante basico - colora i componenti cellulari acidi come gli acidi nucleici.
Successivamente, controcolorare il tessuto con eosina Y. L'eosina Y - un colorante acido - colora i componenti cellulari di base come le proteine citoplasmatiche.
Questa fase di colorazione differenziale aiuta a distinguere tra il citoplasma e altre strutture cellulari, consentendo l'identificazione delle cellule di interesse.
Dopo la colorazione, immergere il tessuto in concentrazioni crescenti di etanolo per disidratare il tessuto ed evitare un'eccessiva distorsione del tessuto.
Quindi, lavare il fazzoletto con xilene. Lo xilene sposta e rimuove l'etanolo dalla sezione tissutale.
Infine, aggiungere una soluzione di montaggio adatta sulla sezione di tessuto per preservare la morfologia del tessuto.
La sezione di tessuto trattata è pronta per essere utilizzata per la microdissezione laser, un processo che consente l'isolamento preciso di cellule specifiche dal tessuto.
Immergere i vetrini in immersioni discendenti sequenziali di 30 secondi con etanolo, seguite dalla colorazione con soluzione di cristallovioletto per 20 secondi e 5 secondi in una soluzione di eosina Y allo 0,5%.
Al termine dell'incubazione dell'eosina Y, utilizzare carta da filtro per asciugare i vetrini e disidratare i vetrini in immersioni sequenziali ascendenti di etanolo. Dopo l'immersione di 60 secondi con etanolo, sciacquare i vetrini in un contenitore di xilene per 3 minuti.
Quindi, asciugare i vetrini su una superficie priva di RNasi a temperatura ambiente per 10 secondi prima di montare i campioni in un terreno di montaggio preparato con acqua priva di RNasi. Dopo 10-20 secondi, trasferire i vetrini sulla piattaforma di microdissezione del microscopio.