Estrazione basata su SDS-PAGE di proteine associate alle vescicole extracellulari: una procedura per estrarre proteine dalle vescicole extracellulari e prepararle per la digestione in gel

Per iniziare, prendi una provetta contenente vescicole extracellulari o EV intatte.

Sospendere le EV nel volume desiderato di tampone di lisi e sonicare il campione. Questo trattamento lisa la membrana EV e trancia il materiale genetico, rilasciando le proteine nel tampone.

Centrifuga per pellettizzare i detriti cellulari e il materiale genetico tranciato. Raccogli il surnatante contenente varie proteine.

Aggiungere un colorante di caricamento all'estratto proteico e passarlo su un gel SDS-PAGE.

Immergere il gel in una soluzione colorante per consentire alle molecole del colorante di legare le proteine. Individuare la banda colorata contenente la proteina desiderata e asportarla.

Tagliare la banda colorata in piccoli pezzi per migliorare l'accessibilità delle proteine agli enzimi nei passaggi successivi. Trasferire questi pezzi in una provetta da microcentrifuga.

Aggiungere una soluzione decolorante che rimuova il colorante colorante. Rimuovere la soluzione decolorante esaurita.

Aggiungere una soluzione di riduzione. Incubare per consentire all'agente riducente di scindere i legami disolfuro nella proteina, esponendo i gruppi sulfidrilici liberi.

Trattare le proteine ridotte con un