Saggio Di Sintesi Del Dna: Una Tecnica Per Valutare La Sintesi Del DNA Nelle Cellule Proliferanti Utilizzando L'Incorporazione Radioattiva Di Timidina Triziata

Iniziare prelevando una piastra a pozzetti multipli contenente cellule aderenti.

Trattare queste cellule con un terreno contenente timidina triziata, una versione radioattiva della timidina, e incubarle.

Durante l'incubazione, le cellule che si replicano attivamente incorporano timidina radioattiva. Questa timidina si accoppia con l'adenosina, generando DNA radiomarcato nelle cellule proliferanti.

Rimuovere il materiale esaurito dai pozzetti. Aggiungere un tampone di lisi per lisare le cellule e rilasciare il DNA nella sospensione.

Preparare l'assemblaggio della mietitrice di cellule posizionando i tubi di raccolta della mietitrice sopra i pozzetti della micropiastra.

Applicare una pressione di aspirazione per consentire l'aspirazione del DNA sospeso dai pozzetti. Questo DNA si deposita sulla carta da filtro, formando macchie specifiche.

Ritaglia le cartucce di carta da filtro con macchie di DNA. Trasferire questi chads singolarmente in fiale di scintillazione.

Sovrapporre la carta da filtro con un cocktail a scintillazione. Posizionare la fiala in un contatore a scintillazione liquida.

All'interno del contatore, il DNA marcato emette energia per decadimento radioattivo. Questa ene