Saggio della neurosfera NPC: un test in vitro per valutare la risposta migratoria delle cellule precursori neurali della neurosfera

Le neurosfere sono aggregati sferici non aderenti di cellule precursori neurali o NPC.

Quando vengono piastrate in specifiche condizioni di coltura aderenti, le NPC possono migrare spontaneamente fuori dalla neurosfera.

Per valutare la risposta migratoria delle NPC, in primo luogo, preparare una sospensione di NPC della densità desiderata in un mezzo adatto.

Quindi, seminare la sospensione cellulare in una piastra di coltura contenente terreno di coltura e incubare.

I fattori di crescita specifici nei terreni supportano la proliferazione delle cellule. Inoltre, l'assenza di un substrato di rivestimento mantiene le cellule sospese nei terreni, facilitando la formazione di aggregati cellulari 3D chiamati neurosfere.

Al raggiungimento della dimensione desiderata, raccogliere le neurosfere.

Centrifugare e risospendere il pellet di neurosfera nel terreno diluito.

Quindi, placcare la sospensione della neurosfera in una piastra rivestita di matrice extracellulare contenente terreno diluito e incubare.

Durante la coltura, le neurosfere aderiscono alla matrice extracellulare.

Nel corso del tempo, a causa dei costituenti della matrice extracellulare, alcune NPC iniziano a migrare lontano dal