Isolamento delle cellule cerebrali dalle larve di pesce zebra: una tecnica per ottenere neuroni, macrofagi e microglia intatti dal tessuto cerebrale del pesce zebra

Il cervello del pesce zebra è costituito da neuroni, cellule nervose che svolgono un ruolo di primo piano nell'elaborazione delle informazioni. Inoltre, comprende una popolazione di cellule immunitarie di supporto, tra cui macrofagi e microglia, che abitano lo spazio interneuronale.

Per isolare tutti questi tipi di cellule cerebrali da un pesce zebra, in primo luogo, prendi larve di pesce zebra anestetizzate in una capsula di Petri contenente terreni appropriati.

Visualizza il pesce zebra con uno stereomicroscopio e seziona le teste larvali sopra il sacco vitellino per mantenere intatto il cervello.

Trasferire le teste asportate in un omogeneizzatore riempito con materiale pre-raffreddato, posto su ghiaccio. La bassa temperatura aiuta a prevenire la degradazione delle cellule cerebrali.

Con un pestello, omogeneizzare il tessuto cerebrale del pesce zebra. L'omogeneizzazione disintegra la matrice extracellulare e avvia la dissociazione di neuroni, macrofagi e microglia dal tessuto cerebrale.

Questo passaggio separa anche la mielina, uno strato isolante ricco di lipidi, dai neuroni.

Passare l'omogeneizzato attraverso un colino per intrappolare i grandi grumi cellulari.

Centrifugare il