Generazione di cellule staminali neurali indotte (iNSC) da cellule mononucleate del sangue periferico (PBMNC): una procedura basata sul virus Sendai per riprogrammare le PBMNC in iNSC

Per riprogrammare le cellule somatiche in cellule staminali neurali indotte o iNSCs, cellule staminali che possiedono un'elevata capacità di autorinnovamento e differenziazione, iniziare coltivando cellule mononucleate del sangue periferico in un terreno privo di siero per espandere gli eritroblasti.

Quindi, pipettare la sospensione di eritroblasto in una piastra di coltura. Trattare le cellule con il virus Sendai ricombinante o SeV. Questi virus codificano per la riprogrammazione dei fattori di trascrizione. Centrifugare per sedimentare le cellule e incubare.

Dopo la fusione di SeV con la membrana della cellula ospite, il genoma del virus subisce una trascrizione seguita da una traduzione nel citoplasma. L'espressione ectopica dei fattori di trascrizione innesca il processo di riprogrammazione cellulare senza integrare i geni nel genoma ospite.

Ora, centrifugare la coltura per rimuovere i virus. Risospendere le cellule trasdotte in un mezzo adatto, quindi procedere alla piastratura. Inoltre, centrifugare per rimuovere i detriti cellulari. Risospendere le cellule nel terreno iNSC.

Successivamente, seminare le cellule in una piastra rivestita di proteine. Le cellule si attaccano al