Saggio ripetitivo di provocazione tumorale: un test di coltura in vitro per valutare le cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) per il potenziale di uccisione ripetitiva del tumore

L'immunoterapia del cancro impiega cellule T chimeriche del recettore dell'antigene o cellule CAR T, cellule T geneticamente modificate che esprimono CAR specifiche, che si legano alle cellule tumorali causando la morte cellulare. Per valutare il potenziale di uccisione del tumore delle cellule CAR T in vitro, iniziare con una coltura di sferoidi tumorali cerebrali. Trattare la coltura con una soluzione enzimatica adatta per ottenere una sospensione unicellulare. Centrifugare e risospendere il pellet della cella in un mezzo adatto.

Pipettare il volume desiderato di cellule tumorali seguito da cellule CAR T in una piastra a più pozzetti. In coltura, recettori specifici sulle cellule T CAR riconoscono e si legano ad antigeni specifici sulle cellule tumorali. Questo legame attiva le cellule CAR T e rilascia citochine, con conseguente morte delle cellule tumorali. L'attivazione porta anche ad un aumento della proliferazione delle cellule T CAR.

Sostituire il terreno con un volume uguale di cellule tumorali. Ripetere l'aggiunta di celle a giorni alterni. A seguito di un'esposizione ripetuta all'antigene, poche cellule CAR T possono andare incontro a esaurimento cellulare. Queste cellule