Reazione a catena della polimerasi digitale a goccioline: un metodo per generare reazioni di PCR con nanogocce per rilevare rare mutazioni tumorali

La reazione a catena della polimerasi digitale a goccioline o la tecnologia dPCR suddivide i reagenti di una singola reazione PCR in milioni di reazioni PCR a nanogocce. Questo partizionamento di massa seguito dall'amplificazione rileva una piccola quantità di DNA mutante su un ampio sfondo di DNA wild-type, consentendo la diagnosi precoce del cancro.

Per iniziare, aspirare la master mix dPCR contenente oligonucleotidi marcati in fluorescenza insieme ad altri reagenti PCR e un olio stabilizzante per goccioline. Aggiungere questa miscela master direttamente sul fondo di ogni pozzetto in una provetta per PCR per evitare bolle d'aria. Quindi, aggiungere campioni di DNA alla miscela di reazione e pipettare più volte per mescolare.

Ora, trasferisci l'intera miscela di reazione in un chip specializzato di uno strumento generatore di goccioline. Montare una nuova provetta per PCR sullo strumento generatore di goccioline. Il generatore di goccioline combina il campione e l'olio per formare nanogoccioline discrete con un'area incapsulata che impedisce la contaminazione incrociata tra le goccioline.

Una volta completata la gocciolizzazione, trasferire la provetta della striscia PCR in un ter