Marcatura fluorescente delle cellule di glioma: un metodo di trasfezione basato su vettori lentivirali per ottenere cellule di glioma che esprimono una proteina fluorescente per l'imaging dei tessuti profondi

L'imaging in vivo del cancro al cervello prevede l'iniezione di cellule tumorali marcate in fluorescenza nel cervello del topo per osservare lo sviluppo del tumore. Per la marcatura fluorescente, incubare le cellule di glioma con particelle di lentivirus. Il vettore lentivirale trasporta il gene per la proteina fluorescente a infrarossi, iRFP.

Il virus si lega alla superficie cellulare del glioma e rilascia RNA nella cellula. Gli enzimi cellulari convertono l'RNA virale in DNA a doppio filamento, che si integra nel genoma cellulare e consente l'espressione di iRFP. I massimi di eccitazione ed emissione di iRFP si trovano all'interno di una regione del vicino infrarosso in cui i tessuti hanno un'assorbanza e una dispersione minime. Ciò consente un imaging accurato dei tessuti profondi.

Quindi, rimuovere il terreno esaurito e aggiungere la tripsina. La tripsina, un enzima proteasi, digerisce le proteine di adesione, staccando le cellule dalla superficie del pallone. Pipettare ripetutamente per separare le singole cellule. Raccogliere la sospensione cellulare in una provetta e centrifugare. A questo punto, aggiungere un tampone adatto per risospendere il pellet.

Erogare la sospensione