Isolamento e coltura di periciti cerebrali primari: una procedura per isolare e coltivare periciti da capillari cerebrali bovini senza contaminazione delle cellule endoteliali

Nel sistema nervoso centrale, i periciti sono cellule multifunzionali che avvolgono le cellule endoteliali, che formano il rivestimento cellulare interno dei capillari. I periciti aiutano a regolare il flusso sanguigno e a mantenere l'omeostasi cerebrale.

Per isolare i periciti, iniziare prendendo i capillari del cervello bovino congelati in una fiala. Dopo lo scongelamento, trasferire il contenuto in un tubo contenente il supporto desiderato. Centrifugare per pellettare i capillari. Rimuovere il surnatante contenente il mezzo di congelamento. Risospendere il pellet capillare in un terreno e seminare la sospensione in un pallone rivestito di proteine a matrice extracellulare.

Incubare per consentire ai capillari di aderire al rivestimento nel pallone. Sostituire il terreno con un terreno contenente eparina. In coltura, il rivestimento proteico della matrice extracellulare promuove la migrazione dei periciti dai frammenti capillari e la proliferazione, mentre l'eparina stimola la migrazione delle cellule endoteliali.

Sostituire il terreno esaurito con un terreno contenente eparina. Nel tempo, i periciti proiettano processi allungati che aderiscono fortemente al pallone. Con uno spaz