Isolamento dei capillari cerebrali dal cervello umano: un metodo ottimizzato per estrarre i capillari cerebrali dal tessuto cerebrale umano

I capillari cerebrali sono un componente vitale della barriera emato-encefalica, una barriera semipermeabile che consente il movimento selettivo dei soluti tra il sangue e il cervello. Per isolare i capillari cerebrali, iniziare con tessuto cerebrale umano fresco. Eliminate le meningi e tagliate via la sostanza bianca.

Tritare il tessuto cerebrale in frammenti più piccoli. Trasferire i frammenti in un omogeneizzatore contenente un tampone adatto e omogeneizzare. L'omogeneizzazione disintegra i tessuti, rilasciando capillari e detriti tissutali nella soluzione.

Trasferire l'omogeneizzato in una provetta nuova e aggiungere un volume ottimale di un mezzo di gradiente di densità adeguato. Centrifugare la soluzione per pellettare i capillari. Un mezzo di gradiente di densità troppo o troppo basso si traduce in una bassa resa capillare. Rimuovere il surnatante.

Risospendere il pellet in albumina sierica bovina o tampone integrato con BSA. La BSA stabilizza gli enzimi digestivi e mantiene l'integrità strutturale dei capillari. Quindi, filtrare la soluzione con un filtro appropriato per rimuovere i vasi di grandi dimensioni e i detriti di tessuto.

Quindi, passare il filtrato attraverso un