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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 5:11 min • July 8th, 2025
L'invasione perineurale è un raro fenomeno metastatico in cui le cellule tumorali metastatizzano lontano dal sito di origine per invadere lo spazio perineurale all'interno dei nervi. Il microambiente nervoso fornisce un ambiente adatto per la crescita e la proliferazione del cancro.
Per simulare l'invasione perineurale in vivo, preparare un topo anestetizzato in posizione prona. Fai una piccola incisione parallela sotto il femore della coscia. Separa i muscoli della coscia per rivelare il nervo sciatico sottostante, il nervo più grande e più facilmente accessibile del corpo.
Il nervo sciatico ha origine nella parte inferiore della colonna vertebrale e attraversa i muscoli pelvici fino a ciascuna gamba. Trasmette segnali per il movimento coordinato degli arti inferiori. Quindi, rimuovere i muscoli circostanti dal nervo e tirarlo verso l'esterno usando una spatola sterilizzata per il supporto dell'iniezione.
Ora, prendi una siringa riempita con la sospensione di cellule tumorali e iniettala parallelamente nel nervo. Un rigonfiamento visibile nel nervo conferma l'avvenuta iniezione, mentre qualsiasi perdita intorno al sito di iniezione indica un tentativo fallito. In breve, lasciare che le cellule si stabilizzino all'interno del nervo.
Quindi, ritrarre delicatamente l'ago e riposizionare i muscoli. Successivamente, suturare l'incisione. Consenti al mouse di riprendersi. Alla fine, le cellule tumorali iniziano a migrare dal sito di iniezione verso il midollo spinale, confermando l'invasione perineurale.
Il giorno prima dell'intervento, rimuovere il pelo lungo la lunghezza del femore sul lato dorsale di un topo maschio o femmina C57BL/6J di 8 settimane con un tagliacapelli chirurgico o un agente chimico per la depilazione. Il giorno dell'intervento, disinfettare il palco, anestetizzare i topi usando isoflurano al 2% in una camera di induzione e applicare un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza sotto anestesia.
Iniettare una quantità di analgesico adeguata al peso per via sottocutanea e trasferire un topo su un cono nasale nell'area chirurgica. Il supporto termico è fornito durante tutta la procedura chirurgica. Posizionare il topo anestetizzato sul lato ventrale e fissare delicatamente ogni arto con nastro adesivo ipoallergenico per creare una leggera tensione nell'arto da iniettare.
Pulire il sito di iniezione con tampone di betadina, quindi di nuovo con alcol al 70%. Ripetere questo processo altre due volte e assicurarsi che non rimangano peli sciolti sul campo operatorio. Come passaggio finale, applicare la soluzione di betadine sull'area chirurgica. Dopo aver indossato i guanti sterili e posizionato il telo sterile, utilizzare uno strumento sterile dedicato per applicare il pizzico delle dita dei piedi prima di praticare l'incisione sotto il telo.
Quindi, usa piccole forbici sterili per praticare un'incisione di 1 centimetro circa 2 millimetri sotto e parallela al femore. Ritrarre la pelle con una pinza lateralmente per esporre i muscoli sottostanti. Separare i muscoli del grande gluteo e del bicipite femorale lungo un piano fasciale ed esporre il nervo sciatico sottostante. Libera il nervo dai muscoli circostanti usando la dissezione smussata.
Aspirare 3 microlitri di cellule tumorali dal pellet in una siringa sterile da 10 microlitri. Posizionare una piccola spatola di metallo sotto il nervo nel punto di iniezione per sostenerla. Durante la visualizzazione con il microscopio da dissezione, tenere l'ago parallelo al nervo e inserirlo nel nervo. Fare attenzione a non perforare la parte posteriore del nervo.
Iniettare lentamente le cellule nel nervo in 5 secondi. La formazione di un bulbo nell'area di iniezione indica una buona iniezione. Lasciare l'ago in posizione per 3 secondi per ridurre al minimo il riflusso prima di rimuovere delicatamente l'ago. La corretta iniezione delle cellule tumorali nel nervo sciatico è fondamentale. Se le cellule vengono iniettate al di fuori del nervo, la consistenza dell'invasione ne risentirà. Tuttavia, con la pratica e l'esperienza, questo è molto raro.
Dopo l'iniezione, riportare il nervo nella sua posizione originale e coprire il nervo con i muscoli sovrastanti. Trattare i topi con un'adeguata analgesia e poi chiudere la pelle con suture di nylon 5-0. Metti il topo da solo in una gabbia pulita per l'osservazione e fornisci supporto termico durante il recupero fino a quando non ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere la decubito sternale.