Somministrazione intranasale di cellule staminali neurali terapeutiche (NSC) in modello murino: una procedura per la somministrazione mirata al tumore di NSC caricate con virus oncolitico in un modello murino portatore di tumore cerebrale

Per iniziare, sottoponi una coltura di cellule staminali neurali o NSC a condizioni di basso ossigeno. Questo precondizionamento facilita una maggiore proliferazione delle NSC e le capacità di targeting del tumore. Successivamente, raccogliere le NSC e trattarle con la concentrazione desiderata di virus oncolitico a replicazione condizionata. Incubare per caricare i virus nelle cellule.

Ora, centrifugare la coltura per rimuovere i virus non legati. Risospendere le NSC caricate con virus in un tampone adatto. Nel frattempo, posizionare un topo anestetizzato portatore di tumore cerebrale in posizione supina per facilitare l'accesso alle narici. Somministrare con cura le NSC caricate con virus in ciascuna narice del topo, ripetendo a brevi intervalli di tempo.

Consenti al mouse di riprendersi. Le NSC somministrate per via intranasale nella cavità nasale bypassano la barriera emato-encefalica per entrare nel cervello. All'interno del cervello, il virus si replica all'interno di queste cellule precondizionate e migra verso il sito del tumore, proteggendosi dal sistema immunitario. Nel corso del tempo, le particelle virali rilasciate dalle NSC interagiscono e si legano a specifici recettori di superficie cellulare sovraespressi sulle cellule tumorali.

Dopo l'internalizzazione del virus, questi virus che si replicano condizionatamente si replicano preferenzialmente nelle cellule tumorali e causano la lisi cellulare. Le cellule tumorali lisate rilasciano particelle virali, che infettano le cellule tumorali circostanti, portando a una cascata di infezioni e lisi delle cellule tumorali. La lisi cellulare espone gli antigeni tumorali, attivando una risposta immunitaria contro le cellule tumorali.

Per caricare le cellule staminali neurali umane con virus oncolitico, infettare le cellule staminali con 50 replicazioni condizionali di particelle virali di adenovirus per cellula secondo i protocolli standard di trasfezione dell'adenovirus per 2 ore a temperatura ambiente con picchiettamento periodico. Quindi, lavare le cellule tre volte con terreno fresco per rimuovere eventuali particelle virali non legate e sospendere le cellule in soluzione fisiologica sterile per la somministrazione intranasale.

Quando le cellule sono state modificate in modo sperimentale, posizionare gli animali anestetizzati portatori di tumore in posizione supina su un drappo pulito sopra un cuscinetto termico e posizionare un cuscino imbottito sotto le teste per mantenere le narici ad angolo retto. Il materiale del cuscino deve essere di plastica lavabile con alcol o di asciugamani di carta arrotolati usa e getta per evitare la contaminazione incrociata degli animali.

Quando i topi sono in posizione, utilizzare una micropipetta per erogare 2 microlitri della popolazione sperimentale di cellule staminali neurali umane di interesse in ciascuna narice del primo topo, confermando visivamente l'aspirazione della gocciolina prima di applicare il volume successivo di cellule. Ripetere la consegna a ciascun mouse a turno. Quindi, attendi 5 minuti e applica il prossimo giro di celle. Quando tutti e quattro i cicli di celle sono stati somministrati, porre gli animali in una camera di risveglio con monitoraggio fino al completo recupero.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.