Induzione del glioblastoma mediante trasposizione mediata da SB: una tecnica per generare un nuovo modello murino utilizzando l'integrazione mediata da trasposoni del plasmide SB nel cervello di topo neonatale

Inizia prendendo una provetta contenente un mix di plasmidi. Il plasmide trasposone della bella addormentata o SB è progettato per trasportare un elemento trasponibile che comprende un oncogene che induce il glioblastoma di derivazione umana inserito tra due sequenze ripetute invertite. Inoltre, questa miscela contiene un plasmide trasposasi SB che ha un elemento che esprime l'enzima trasposasi.

A questo punto, aggiungere un reagente di trasfezione adatto alla provetta. Aspirare la miscela per iniezione in una siringa dotata di microago. Quindi, fissare un cucciolo di topo anestetizzato in posizione prona su un telaio stereotassico. Visualizza la regione della testa del cucciolo per individuare le suture craniche. Posizionare il microago sopra le suture craniche.

Iniettare la miscela nel ventricolo laterale, una cavità all'interno del parenchima cerebrale. Successivamente, la soluzione si disperde nel parenchima cerebrale, dove le molecole reagenti di trasfezione facilitano l'ingresso dei plasmidi all'interno delle cellule. Una volta all'interno della cellula, il plasmide della trasposasi esprime le molecole dell'enzima trasposasi, che riconoscono le sequenze ripetute invertite e a