Isolamento dei vasi cerebrali di topo: un protocollo per isolare i vasi intatti da un campione di cervello murino

I vasi cerebrali sono circondati da uno strato di cellule endoteliali strettamente connesse. Queste cellule hanno una membrana basale intorno a loro insieme a componenti cellulari come periciti e astrociti.

Per isolare i vasi cerebrali dai neuroni circostanti e dalle cellule gliali, prendi un becher contenente cervello di topo immerso in un tampone di omogeneizzazione. Tritalo a pezzetti. Omogeneizzare il tessuto cerebrale per dissociarlo, rilasciando neuroni, cellule gliali e vasi cerebrali. Questo trattamento interrompe anche la guaina mielinica che circonda i neuroni.

Trasferire l'omogeneizzato in una provetta e centrifugare per pellettizzare i recipienti. I componenti più leggeri come i neuroni e le cellule gliali rimangono nel surnatante mentre la mielina forma uno strato di interfaccia denso che circonda il pellet.

Scartare il surnatante e risospendere il pellet del recipiente con lo strato di mielina attaccato in un mezzo di gradiente di densità adeguato. Centrifugare per pellettare i recipienti e ottenere una banda di mielina ricca di grassi che galleggia nella parte superiore del surnatante. Rimuovere la fascia mielinica insieme al terreno esaurito e risospendere il pellet