Saggio di fagocitosi in vitro: un metodo basato sull'imaging dal vivo per studiare la fagocitosi sinaptosomica mediata da astrociti in tempo reale

I sinaptosomi sono frazioni neuronali isolate ricche di vescicole sinaptiche. Questi sinaptosomi sono inghiottiti dagli astrociti, una popolazione di cellule immunitarie nel cervello, attraverso un processo noto come fagocitosi.

Per studiare la fagocitosi in vitro mediata da astrociti, iniziare prendendo una piastra di coltura contenente un monostrato di astrociti. Ora, aggiungere alla piastra la sospensione di sinaptosoma coniugato con indicatore di pH. Questo colorante indicatore ha la proprietà di emettere fluorescenza esclusivamente a basso pH. Incubare la piastra per la durata desiderata.

Durante l'incubazione, la fosfatidilserina o PS presente sulla membrana esterna del sinaptosoma gli permette di legarsi ai corrispondenti recettori PS sulla membrana degli astrociti. Questo facilita l'insediamento dei sinaptosomi alla base. Aspirare il terreno esaurito insieme ai sinaptosomi non legati dalla piastra.

Successivamente, integrare la piastra con fattori che promuovono la fagocitosi e incubare. Successivamente, visualizzare la lastra utilizzando un microscopio a fluorescenza. Dopo essersi legati alla superficie, gli astrociti inghiottono i sinaptosomi facendoli entrare nei fagosom